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講述安捷倫液相色譜儀的梯度洗脫
點擊次數:723 發布時間:2018-07-21
   講述安捷倫液相色譜儀的梯度洗脫
  安捷倫液相色譜儀根據固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)。現代液色相譜儀由高壓輸液泵、進樣係統、溫度控製係統、色譜柱、檢測器、信號記錄係統等部分組成。與經典液相柱色譜裝置比較,具有、快速、靈敏等特點。對高沸點、難氣化合物的混合物通過色譜柱和淋洗劑並以實現分離。應用於生物化學、生物醫學、環境化學、石油化工等部門。
  安捷倫液相色譜儀的梯度洗脫有兩種方式:低壓梯度(外梯度)和高壓梯度(內梯度);
  兩種溶劑組成的梯度洗脫可按任意程度混合,即有多種洗脫曲線:線性梯度、凹形梯度、凸形梯度和階梯形梯度。線性梯度常用,尤其適合於在反相柱上進行梯度洗脫。在進行梯度洗脫時,由於多種溶劑混合,而且組成不斷變化,因此帶來一些特殊問題,必須充分重視:
  1.要注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相,有些溶劑在一定比例內混溶,超出範圍就不互溶,使用時更要引起注意。當有機溶劑和緩衝液混合時,還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
  2.梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,以保證良好的重現性。進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫,以辨認溶劑雜質峰,因為弱溶劑中的雜質富集在色譜柱頭後會被強溶劑洗脫下來。用於梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣,以防止混合時產生氣泡。
  3.混合溶劑的粘度常隨組成而變化,因而在梯度洗脫時常出現壓力的變化。如甲醇和水粘主度都較小,當二者以相近比例混合時粘度增大很多,此時的柱壓大約是甲醇或水流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的大壓力。
  4.每次梯度洗脫之後必須對色譜柱進行再生處理,使其恢複到初始流動相流經色譜柱,使固定相與初始流動相達到完全平衡。
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